| La capacidad de la nitrogenasa para reducir
compuestos con triples enlaces se utiliza desde finales de los 60 para
medir esta actividad enzimática. Para ello sólo basta colocar
el cultivo bacteriano en microaerobiosis y sustituir el 10 por ciento
de su atmósfera por acetileno. Transcurrido un tiempo (unos minutos)
se toma una muestra y se inyecta en un cromatógrafo de gases equipado con una columna de Porapak Q y trabajando en las condiciones adecuadas para la correcta resolución entre el acetileno y etileno. Si
hay actividad nitrogenasa apareceran los picos correspondientes al acetileno
y etileno. La actividad es proporcional al etileno producido y haciendo
medidas a varios tiempos se puede conocer la cinética de la reducción,
así como la actividad específica expresada por mg de proteína,
número de células, etc. En el caso de utilizar esta técnica
para la medida de actividad nitrogenasa en nódulos, se coloca la
planta entera, su raíz o nódulos separados en un recipiente
cerrado en el que se substituye el 10 por ciento de su atmósfera
por acetileno. Al cabo del tiempo se toman muestras para el cromatógrafo.
En este caso no es necesario la miroaerobiosis pues la propia estructura
del nódulo crea el ambiente adecuado. La actividad específica
se expresa por planta, peso nódulos, etc. Hay que tener en cuenta
que esta técnica sólo es útil para conocer si un
organismo o sistema esta provisto de o expresa la capacidad fijadora, pero
al ser medidas puntuales, los estudios comparativos, sobre todo en caso
de plantas, no son muy fiables dada la cantidad de factores que afectan
el proceso. El valor más fiel
y valioso en estudios comparativos es la integral del nitrógeno
fijado, esto es, el nitrógeno total en planta al cabo del tiempo.
Por otra parte, el uso de ARA en plantas, para que pudiera dar valores
más reales habría que hacerla en atmósfera en flujo
continuo oara evitar la inhibición de la nitrogenasa y la disminución
de la cantidad de oxígeno presente, lo que requiere sistemas complicados
y poco prácticos. |